血液分析仪及其临床应用

要点1：
　　电阻抗法血细胞计数原理（库尔特原理）是将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器中，将小孔管（也称传感器）插进细胞悬液中。小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。
　　如图：电阻抗原理示意图
　　
　　当接通电源后，位于小孔管两侧的电极产生稳定电流，稀释细胞悬液从小孔管外侧通过小孔管壁上宝石小孔（直径＜100μm，厚度约75μm）向小孔管内部流动，使小孔感应区内电阻增高，引起瞬间电压变化形成脉冲信号，脉冲振幅越高，细胞体积越大，脉冲数量越多，细胞数量越多，由此得出血液中血细胞数量和体积值。
　　如图：血液分析仪计数原理示意图
　　
　　要点2：
　　白细胞分类计数原理
　　根据电阻抗法原理，经溶血剂处理的、脱水的、不同体积的白细胞通过小孔时，脉冲大小不同，将体积为35～450fl白细胞，分为256个通道，其中，淋巴细胞为单个核细胞，颗粒少，细胞小，位于35～90fl的fl小细胞区，粒细胞（中性粒细胞）的核分多叶，颗粒多，胞体大，位于160fl以上的大细胞区，单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始细胞、幼稚细胞等，位于90～160fl的单个核细胞区，又称为中间型细胞。
　　如图：三分类血球分析仪工作原理示意图
　　
　　要点3：
　　光散射法白细胞计数和分类计数原理
　　容量、电导、光散射（VCS）法
　　1）利用电阻抗法原理测量细胞体积（V）。
　　2）利用电导（C）技术测量细胞内部结构：原理是利用高频电磁探针测量细胞内部结构，根据细胞核和细胞质比例、细胞内颗粒大小和密度来识别体积相同、但性质不同的两类细胞群体，如小淋巴细胞和嗜碱性粒细胞。
　　3）利用光散射（S）技术测量细胞形态和核结构：原理是利用激光照射进入计数区的每个细胞，根据散射光角度（10°～70°）的不同，提供每个细胞形态、核结构信息来鉴别中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。
　　根据VCS原理，显示3种细胞散点图：DF1（体积和散射光）、DF2（体积和电导）、DF3（体积和电导，但只显示嗜碱性粒细胞群）。
　　如图：五分类血球分析仪原理示意图
　　
　　要点4：
　　正常白细胞直方图，在35～450fl范围内将白细胞分为3群，左侧峰又高又陡为淋巴细胞峰，最右侧峰又低又宽为中性粒细胞峰，左右两峰间的谷区较平坦为单个核细胞峰。异常直方图意义见下表。
　　如表：白细胞直方图变化的部分原因

　　如图：急性淋巴细胞白血病时的白细胞直方图特点
　　
　　如图：急性淋巴细胞白血病时的白细胞直方图特点
　　
　　如图：急性非淋巴细胞白血病时的白细胞直方图特点
　　
　　如图：慢性淋巴细胞白血病时的白细胞直方图特点
　　
　　如图：单核细胞增多或嗜酸细胞增多症时的白细胞直方图特点
　　
　　如图：异常淋巴细胞增多症时的白细胞直方图特点
　　
　　如图：慢性粒细胞白血病时的白细胞直方图特点
　　
　　要点5：
　　红细胞直方图正常红细胞直方图，在36～360fl范围内分布两个细胞群体，从50～125fl区域有一个两侧对称、较狭窄的曲线，为正常大小的红细胞，从125～200fl区域有另一个低而宽的曲线，为大红细胞、网织红细胞。当红细胞体积大小发生变化时，峰可左移或右移，或出现双峰。
　　如图：缺铁性贫血红细胞直方图
　　
　　如图：轻型珠蛋白生成障碍性贫血红细胞直方图
　　
　　如图：铁幼粒细胞性贫血红细胞直方图
　　
　　要点6：
　　血小板直方图正常血小板直方图，在2～30fl范围内分布，呈左偏态分布，集中分布于2～15fl内。当有大血小板或小红细胞、聚集血小板时，直方图显示异常。
　　
　　如图：受干扰的异常血小板直方图
　　（a）大量红细胞碎片
　　（b）多数血小板聚集
　　（c）小红细胞增多
　　要点7：
　　方法学评价
　　仪器性能的评价新仪器安装、每次仪器维修后须对仪器性能进行测试、评价。ICSH公布的血液分析仪评价方案，包括下列内容：可比性、准确性、总重复性、精密度、线性范围、携带污染。
　　要点8：
　　干扰血液分析仪检测的因素

　　要点9：
　　红细胞血红蛋白分布宽度（HDW）
　　反映红细胞内Hb含量异质性的参数，用单个红细胞Hb含量的标准差表示，正常参考范围为24～34g／L。遗传性球形红细胞增多症时RDW、HDW明显增高，为小细胞不均一性高色素性贫血。
　　要点10：
　　血小板平均体积（MPV）
　　（1）鉴别血小板减低的病因：MPV增高，见于外周血血小板破坏过多所致血小板减低。MPV减低，见于骨髓病变所致血小板减低。
　　（2）评估骨髓造血功能恢复情况：局部炎症时，骨髓造血未抑制，MPV正常。败血症时，骨髓造血受抑制，MPV减低。白血病缓解时，MPV增高。骨髓造血衰竭，MPV和血小板计数持续减低。骨髓功能恢复时，MPV先上升，血小板计数随后上升。
　　要点11：
　　血小板分布宽度（PDW）
　　仪器测量一定数量血小板体积后，计算所得外周血血小板体积大小异质性参数。用血小板体积变异系数（CV）来表示。PDW增大见于急性白血病化疗后、巨幼细胞性贫血、慢性粒细胞白血病、脾切除后、巨大血小板综合征、血栓性疾病、原发性血小板增多症、再生障碍性贫血；PDW减低见于反应性血小板增多症。
　　要点12：
　　低荧光强度网织红细胞百分率（LFR）和高荧光强度网织红细胞百分率（HFR）
　　（1）骨髓移植：网织红细胞计数是监测骨髓造血恢复的重要参数，通常移植成功后网织红细胞比白细胞提前3～4d增高。HFR增高提示有较多未成熟细胞从骨髓进入外周血，故HFR变化比网织红细胞计数变化具有更重要意义。
　　（2）贫血：溶血性贫血时Ret、LFR、HFR明显增高；肾性贫血时HFR上升、LFR下降、Ret正常。
　　（3）放疗和化疗：长期化疗导致网织红细胞亚群发生变化，HFR、MFR减低早于LFR。骨髓恢复时，HFR、MFR又迅速上升。
　　点13：
　　网织红细胞成熟指数（RMI）
　　RMI＝（MFR＋HFR）／LFR×100。RMI增高，见于溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜（ITP）、慢性淋巴细胞白血病（CLL）、急性白血病、真性红细胞增多症、再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤。RMI减低，提示骨髓衰竭和造血无效，见于巨幼细胞性贫血。
　　要点14：
　　未成熟网织红细胞指数（IRF）
　　指未成熟网织红细胞与总网织红细胞百分比。未成熟网织红细胞体积较大，含RNA的量多。
　　（1）监测骨髓移植后的情况：骨髓移植后，全血细胞计数、白细胞分类计数、网织红细胞计数是监测骨髓恢复造血的早期指标，其中，IRF是骨髓移植成功最早、最灵敏的指标。
　　（2）监测肾移植后的情况：IRF是肾移植成功较早、较灵敏的指标。
　　要点15：
　　红细胞直方图在贫血中的应用
　　1.小细胞性贫血
　　（1）RDW正常：红细胞主峰左移，分布在55～100fl，波峰在75fl处，基底较窄，为小细胞低色素均一性图形，见于轻型地中海贫血。
　　（2）RDW轻度增高：红细胞主峰左移，分布在55～100fl，波峰在65fl处，为小细胞低色素和细胞不均一性图形，见于缺铁性贫血。
　　（3）RDW明显增高：红细胞显示双峰，小细胞峰明显左移，波峰在50fl处，大细胞峰顶在90fl处，基底较宽，为小细胞低色素不均一性图形，见于铁粒幼细胞性贫血、缺铁性贫血经治疗有效时。
　　2.大细胞性贫血
　　（1）RDW正常：红细胞主峰右移，分布在75～130fl，波峰在100fl处，为大细胞性图形，见于溶血性贫血、白血病前期、再生障碍性贫血、巨幼细胞性贫血。
　　（2）RDW轻度增高：红细胞峰右移，基底增宽，分布在75～150fl，波峰在105fl处，为大细胞不均一性图形，见于巨幼细胞性贫血。
　　（3）RDW明显增高：红细胞峰右移，出现双峰，以100fl处峰为主，为大细胞不均一性图形，见于巨幼细胞性贫血治疗初期。
　　3.正细胞性贫血
　　（1）RDW正常：红细胞分布在55～110fl，波峰在88f1处，为正常红细胞图形，见于慢性病贫血、急性失血、骨髓纤维化、骨髓发育不良。
　　（2）RDW轻度增高：红细胞分布在44～120fl，波峰在80fl处，为红细胞不均一性图形，见于血红蛋白异常、骨髓纤维化。
　　（3）RDW明显增高：红细胞分布在40～150fl，波峰在90fl处，为红细胞不均一性图形，见于早期或混合性营养不良。